ПЦР-анализ, ПЦР-диагностика инфекций

пцр анализ пцр диагностика
Во времена Авиценны с лабораторными исследованиями было плохо. Образцы крови, мочи, кала и других материалов от больных врачи оценивали на цвет, запах, вкус (!), смотрели за их изменениями при нагревании, хранении и т.д. Например, единственным методом диагностики сахарной болезни (сахарного диабета) было выполнение своеобразного теста. Его смысл заключался в том, что мочу оставляли на воздухе и смотрели, слетались ли на нее пчелы и мухи. Естественно, достоверность проводимых «анализов» была крайне низка.

К счастью, мы с Вами живем в совершенно другое время, когда возможности диагностики пусть и не безграничны, но очень велики. Теперь для того, чтобы определить результаты общего анализа крови, врачу-лаборанту не надо тратить на это значительное время, проводить его над микроскопом, а потом скрупулезно заполнять бланк; достаточно просто на несколько секунд поместить пробирку в специальный аппарат, который сам выдаст нужные результаты в распечатанном виде. Так и с другими исследованиями. Например, сейчас любую инфекцию, даже протекающую скрыто, можно выявить, «размножив» в образце материала копии ее ДНК. Эта удивительная методика, ставшая для нас уже довольно обыденной, носит название ПЦР, что означает «полимеразная цепная реакция».

Основа метода

Объяснить сущность ПЦР-диагностики довольно просто, хотя при ее проведении происходят сложнейшие процессы.

В основе метода лежит выявление ДНК инфекционного возбудителя, будь то вирус, бактерия или простейшее. Если в материале больного содержится хотя бы минимальное количество ДНК, хотя бы след пребывания в нем микроба, то проба даст положительный результат.

Для проведения анализа ПЦР образец крови (или мазок, или соскоб, или что-то другое) помещают в специальный аппарат, где к нему добавляют ферменты, обладающие способностью воздействовать на генетический материал. Эти ферменты «находят» фрагменты ДНК и воспроизводят на их основе большое количество точных копий. На основе одного фрагмента могут быть созданы тысячи аналогов, что увеличивает общий объем генетического материала возбудителя в образце.

После этого ДНК обнаруживается специальными пробами, направленными на выявление антигенов различных возбудителей.

При помощи ПЦР можно не только дать ответ на вопрос, есть ли у человека конкретное заболевание, но и в некоторых случаях определить количественные показатели, грубо говоря, установив, сколько микробов находится в организме больного (это отражает тяжесть и фазу заболевания – обострение или ремиссия).

Диагностика каких инфекций возможна методом ПЦР?

При необходимости, можно выполнить ПЦР-диагностику нескольких десятков разных инфекций, но наиболее «актуальными» являются несколько из них, перечисленные ниже. Особенно большую важность ПЦР приобретает тогда, когда предстоит выявить скрытые инфекционные заболевания, при которых микробы, попавшие в организм и развивающиеся в нем, не вызывают какой-либо симптоматики, но вредят здоровью и провоцируют появление осложнений. Так как в большинстве случаев скрытым течением отличаются половые инфекции, то и ПЦР, соответственно, наиболее востребована в определении заболеваний, передающихся половым путем.

Характерно, что некоторые болезни могут вызываться сразу несколькими видами одного рода микробов или несколькими штаммами одного вида. В этих случаях ПЦР способна определить в мельчайших деталях, какой именно возбудитель вызвал патологический процесс.

Итак, метод полимеразной цепной реакции используется при диагностике следующих заболеваний и при выявлении следующих возбудителей:

- вирусные гепатиты (вирус гепатита В и С);

-микоплазмоз (Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium);

- уреаплазмоз (Ureaplasma urealiticum, Ureaplasma parvum);

- хламидиоз (Chlamydia trachomatis);

- кандидоз (Candida albicans);

- трихомониаз (Trichomonas vaginalis);

- туберкулез (микобактерия туберкулеза);

- герпес (вирусы простого герпеса 1,2 типов);

-Helicobacter pylori (бактерия, ассоциированная с хроническим гастритом и язвенной болезнью);

- вирус папилломы человека, включая онкогенные серотипы;

- вирус иммунодефицита человека;

И др.

ПЦР и ложноположительные результаты

Метод полимеразной цепной реакции очень точен, но это является не только его важнейшим достоинством, но и проблемой. Дело в том, что иногда при ПЦР бывают ложноположительные результаты.

По данной причине при некоторых заболеваниях выполнять диагностику методом ПЦР бесполезно. Например, существует такое расстройство, как гарднереллез, или бактериальный вагиноз. При нем у женщин происходит нарушение микрофлоры влагалища, отмечается слишком активное размножение некоторых компонентов флоры, а именно, бактерий-гарднерелл. Если этих бактерий немного, их наличие не вызывает симптомов, но при их присутствии в слишком больших количествах развивается воспаление, появляется зуд и выделения.

Если сделать здоровой женщине и пациентке с вагинозом классический анализ ПЦР, то в обоих случаях придет положительный результат. Обследование не «учтет» того, что гарднереллы могут быть и в норме, оно, в любом случае, распознает их как «врагов». В данных случаях прибегают к количественному анализу, о котором мы поговорим ниже.

Точно также, порой ложноположительная ПЦР определяется в том случае, если вместо «вредных» видов микробов определенного рода в материале присутствуют «безвредные».

Несмотря на некоторую вероятность появления ложных результатов, в целом ПЦР-диагностика является очень точной; к тому же, со временем ее технология совершенствуется, так что в будущем, возможно, о проблеме ложноположительных результатов можно будет забыть. Но пока, увы, возможность их получения надо держать в уме.

Надеемся, эта информация не приведет к тому, что Вы потеряете доверие к методике. В целом она гораздо более надежна, чем многие другие анализы. В частности, она во много раз реже дает ложноотрицательные результаты, которые весьма свойственны не менее популярному анализу ИФА. Все же, не зря Кэри Мюллис, «первооткрыватель» ПЦР, стал обладателем Нобелевской премии…

Сдача анализа ПЦР

Для проведения ПЦР-диагностики могут быть взяты самые разные виды материалов, но при определенных заболеваниях, как правило, берутся те образцы, в которых легче всего обнаружить возбудителя.

Инфекции, проникающие в кровь (например, вирусные гепатиты или ВИЧ), требуют взятия крови, большинство половых инфекций, живущих в соответствующих местах, выявляются при изучении мазка из влагалища, канала шейки матки или уретры. Внутриклеточные возбудители ЗППП, например, микоплазма, определяются в ходе изучения соскобов из половых путей. Иногда для диагностики могут браться моча, слюна, мазок из зева.

Любой материал забирается в порядке, определенном стандартными правилами.

Кровь берется из вены натощак, в день перед ее забором необходимо отказаться от приема жирной пищи и аллергенных продуктов. Первая утренняя моча собирается в стерильные контейнеры после предварительного туалета промежности и относится в лабораторию. Для взятия мазка из влагалища пациентка располагается на гинекологическом кресле, а специалист при помощи стерильного инструмента берет образец из нужной зоны. У мужчин мазок или соскоб на ЗППП берется из наружной части мочеиспускательного канала. Рассказывать, как берется мазок из зева, судя по всему, не надо – в детстве каждый человек несколько раз проходил эту простую процедуру.

После этапа забора материала пациент может не думать о его дальнейшей судьбе: образец, с соблюдением всех необходимых правил хранения и транспортировки, будет доставлен в лабораторию, где его затем исследуют. К сожалению, ПЦР нельзя назвать быстрым способом диагностики, изготовление результатов может потребовать нескольких дней, в среднем – недели. Впрочем, это не предел максимальной продолжительности изготовления результатов анализа. Например, чтобы провести бактериологическое исследование на туберкулез, надо подождать месяц – быстрее колонии палочки Коха расти не могут.

Расшифровка результатов ПЦР

В наиболее простых случаях над результатами анализа не приходится долго раздумывать, так как они выдаются в предельно понятном виде: записи «отрицательно» или «положительно» на распечатанном бланке. При отрицательном результате ПЦР пациент может быть уверен в том, что в его организме нет признаков инфекции, на поиск которой был направлен проводимый анализ. Положительный ПЦР-тест, скорее всего, говорит об обратной ситуации, хотя, как уже упоминалось выше, в редких случаях возможно появление ложноположительных результатов.

Существует такая разновидность полимеразной цепной реакции, как ПЦР в реальном времени. При этом анализе определяется не только наличие генетического материала возбудителя в пробе, но и его количественное содержание, что позволяет делать еще более точные выводы об имеющемся заболевании. В этом случае результаты исследования выдаются в цифрах. Пациенту не всегда удается правильно их расшифровать, так что окончательные выводы о том, страдает ли человек инфекцией, должен делать врач, в зависимости от установленного титра ДНК в пробе материала.

На сегодня анализ ПЦР является одним из самых надежных лабораторных исследований, которые только могут быть проведены больному. Однако это не значит, что отныне при подозрении на любую инфекцию Вы должны обращаться только к этому виду диагностики. Для определенных заболеваний существуют свои предпочтительные методы исследования, поэтому лучше предварительно обратиться к специалисту, чтобы тот подсказал, какой именно анализ лучше использовать в каждом конкретном случае.

Понравилась статья — поделитесь

2 Comments on “ПЦР-анализ, ПЦР-диагностика инфекций

  • Здравствуйте. Пришли анализы не могу понять, две графы анализы и норма, где анализы написано положительно а где норм отрецательно.А в некоторых анализах в двух графах отрицательно. Помогите.

    Reply
  • Добрый день! Подскажите с анализами от компании Инвитро:
    U
    Эпителей 8-10 в пз/р
    Лейкоциты 2-3 в пз/р
    Микрофлора (+) кокки
    Трихомонады не обнаружено
    Гоноккоки не обнаружено

    Reply

Добавить комментарий для Петр Отменить ответ

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Можно использовать следующие HTML-теги и атрибуты: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <strike> <strong>

Поиск